Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型式糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出家兔自身突变到显现出1改型白血病临床副作用的方面赴援在儿童时期就有很好的阐述，多个家兔自身突变乙型肝炎的儿童中都有70%在血清类比后10年内入院白血病，而随访15年的儿童这一人口比例缩减到84%。相较之下，占临床1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的胃癌机制还不能获得合理的研究工作。

越来越多的人开始运用于仍须系统来定义1改型白血病的方面：性状在显现出多种家兔自身突变时转入第1下一阶段，显现出血糖异常时转入第2下一阶段，显现出副作用时转入第3下一阶段。一些多发家兔自身突变乙型肝炎的性状，在1期和2期，方面较慢速，并发展为胃癌的1改型白血病。我们先前阐述了都由在首次验证到多种家兔自身突变样本后至寡10年无白血病的变慢速方面者，这三组患儿次数寡，但相似性十分确切。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T肝细胞化学反应将在方面较慢速的患儿中都基本不普遍存在，但在近期胃癌和则有的白血病患儿中都很容易验证到。这可能表明，与方面患儿相较，这些患儿神经性化学反应将的调节增强。

最初研究工作表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)运用于量正常，但白血病患儿普遍存在一些功能性有缺陷，其中都包括对IL-2的化学反应将技能提高。此外，白血病患儿中都的畸变CD4+T肝细胞可能对调节更是具抵抗性，发挥为畸变T肝细胞的可抑制移向，自然激发的Treg和体外激发的作用于Treg，以及抗原历程的CD4+T肝细胞中都IL-2化学反应将移向。本研究工作的借此是阐述了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一个大极较慢速方面者中都的相似性，他们的年龄组为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方式：BOX研究工作是一项以许多人为基础的主干研究工作，在21岁所列确诊的患儿亲属中都定期检查1改型白血病的危险因素所。我们先前阐述了曾一度较慢速方面者的相似性，他们始终保持多重家兔自身突变乙型肝炎超过10年，但不能显现出白血病的临床副作用，慢速性或非受虐神经性。随后，10名继续始终保持无白血病并不想提供大量血液样本的较慢速方面者纳入T和B肝细胞功能性分析。在目前为止的研究工作中都，8名慢速方面者(SP三组)，中都位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的家兔自身突变乙型肝炎。所有的发起者都位处1改型白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身突变对某些抗原的乙型肝炎，然而，一名患儿已经位处2期至寡6年，但不能显现出临床副作用，一名患儿被病因为白血病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在统计学中都对该NADP顺利进行了单独检验。分开外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞术和T肝细胞可抑制试制检验NADP中都Treg的频序、表改型和功能性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析，检验Treg表改型。

结果：与肥胖症NADP相较，来自慢速方面体的梦境CD4+T肝细胞的监督聚类结果显示，转录的梦境CD4+ Treg频序缩减，与糖皮质激素作用于的TNFR关的蛋白(GITR)解读缩减有关。一名HbA1c增大的患儿与方面较慢速者和反之亦然的对照三组相较，Treg序各有多种不同。功能性最近，与肥胖症NADP相较，来自较慢速方面体的Treg介导的CD4+畸变T肝细胞可抑制明显受到影响。发挥为对畸变CD4+T肝细胞CD25和CD134解读的可抑制缩减。

所示1 侧重的表改型分析结果显示，CD4+Treg亚改型在慢速方面字段中都缩减。由FlowSOM生成的Treg室，周围在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标识物解读鉴定出10个元簇:梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)运用于9个多种不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个路由器均是由一个一个大(100个一个大)，更是大的元一个大(10个元一个大)在路由器三组周围上色。每个路由器中都的粥所示指出单个标识的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整体标识解读。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成所示，以及FlowSOM标识的每个元簇的较厚。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster筒终点站所示(总质量> 0.05%)确切为HD和SP三组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T肝细胞(l)。浅橙色格子均是由捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 运用于CITRUS的预测模改型证明，Treg频序的缩减是方面较慢速的标识。分级旁路(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和反之亦然的HD发起者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相似之处。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的均是由性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行分开，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)三组以及NADPSP 606(浅橙色)中都CD25+ cd127的频序汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的筒终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，对角出彩的簇被标识为SP和HD字段间的多种不同。(j)筒终点站所示结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)三组中都，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(人口比例)。(k)平方和结果显示每个簇的表改型(粉红色)和Treg标识一般来说解读与背景解读(橙色);上列，文件系统Treg_3;下面四人，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇中都标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与肥胖症献血者相较，方面较慢速者梦境treg的GITR缩减。每个梦境CD4+T肝细胞元簇(梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个解读标识的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热所示(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(浅橙色)的FlowSOM GITR解读接在，结果显示平方和(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅橙色)所有NADP包括，p< 0.05(橙色)NADPSP 606和反之亦然的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(浅橙色)接在，结果显示平方和(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自较慢速方面的CD4+ treg肝细胞压制畸变CD4+T肝细胞的技能提高。SP三组用橙色的终点站和格子指出，HD三组用黑色的终点站和格子指出，浅橙色的终点站/格子指出NADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按捕捉到的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠作用于肝细胞，培育出3紧接著顺利进行流式肝细胞术验证。(a-d)与CD4+；也者一般来说应将的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育出。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。运用于乙型肝炎对照(转录的响应将肝细胞不含treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T肝细胞对较慢速方面的T肝细胞作用于的可抑制更是敏感。SP三组用橙色的终点站和格子指出，HD三组用黑色的终点站和格子指出，浅橙色的终点站/格子指出NADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按捕捉到的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠作用于肝细胞，培育出3紧接著顺利进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者都由培育出。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE可抑制百分赴援(b)。(c,d) CD25可抑制百分赴援(c)和CD134可抑制百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论结论：我们推论的推论结论是，来自较慢速方面子的作用于梦境CD4+Treg在GITR解读中都获得了构建和多样，强调了进一步研究工作Treg在1改型白血病高风险性状中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28