Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改进型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出家兔自身免疫球蛋白到显现出1标准型肝炎临床症状的成效率在儿童后期就有很好的阐述，多个家兔自身免疫球蛋白阳性的儿童中会有70%在血清转换后10周内身患肝炎，而随访15年的儿童这一比例降低到84%。相比来说之下，占临床1标准型肝炎一半以上的标准型1标准型肝炎的确诊机制还没有赢取充份的学奥义研究。

越来越多的人开始用于有种系统种系统来判别1标准型肝炎的成效：个体在显现出多种家兔自身免疫球蛋白时重回第1收尾，显现出低血糖异常时重回第2收尾，显现出症状时重回第3收尾。一些多发家兔自身免疫球蛋白阳性的个体，在1期和2期，成效较迟，并发展为确诊的1标准型肝炎。我们以后阐述了一两组在首次验证到多种家兔自身免疫球蛋白样本后至少10年无肝炎的极迟成效者，这两组患儿人数少，但形态极其明确。随后，我们推断出家兔自身抗原特异性CD8+T细胞会催化在成效缓迟的患儿中会大体不普遍存在，但在近期确诊和长期普遍存在的肝炎患儿中会很不易验证到。这可能证明，与成效患儿相比来说，这些患儿自身免疫催化的调节增强。

早期学奥义研究证明，尽管调节性T细胞会(Treg)数量正常，但肝炎患儿普遍存在一些动态缺陷，其中会有数对IL-2的催化能力降低。此外，肝炎患儿中会的波动CD4+T细胞会可能对调节极其具抵抗性，平庸为波动T细胞会的依赖性减弱，自然导致的Treg和体外导致的诱导Treg，以及抗原年中的CD4+T细胞会中会IL-2催化减弱。本学奥义研究的目的是阐述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群极缓迟成效者中会的形态，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX学奥义研究是一项以一些人为基础的交叉学奥义研究，在21岁此表确诊的患儿亲属中会检查1标准型肝炎的危险因素。我们以后阐述了长期缓迟成效者的形态，他们保持多重家兔自身免疫球蛋白阳性有约10年，但没有显现出肝炎的临床症状，迟性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量血液样本的缓迟成效者纳入T和B细胞会动态分析原理。在目前的学奥义研究中会，8名迟成效者(SP两组)，中会位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身免疫球蛋白阳性。所有的参与者都处于1标准型肝炎成效的1期，尽管一些人随后夺去了家兔自身免疫球蛋白对某些抗原的阳性催化，然而，一名患儿早已处于2期至少6年，但没有显现出临床症状，一名患儿被诊断为肝炎，该病患72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在分析原理中会对该NADP展开了单独检验。裂解外周血单个核能细胞会(PBMCs)，选用多参数流式细胞会奥义和T细胞会依赖性试验检验NADP中会Treg的Hz、表标准型和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无监督聚类分析原理，检验Treg表标准型。

结果：与身心健康NADP相比来说，来自迟成效体的遗忘CD4+T细胞会的监督聚类显示，酪氨酸的遗忘CD4+ TregHz降低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解降低有关。一名HbA1c下降时的患儿与成效缓迟者和冗余的对照两组相比来说，Treg曲谱有所各有不同。动态分析原理证明，与身心健康NADP相比来说，来自缓迟成效体的Treg介导的CD4+波动T细胞会依赖性明显损伤。平庸为对波动CD4+T细胞会CD25和CD134理解的依赖性降低。

左图1 深入的表标准型分析原理显示，CD4+Treg亚标准型在迟成效描述符中会降低。由FlowSOM分解成的Treg室，四周在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标有物理解鉴定出10个元簇:遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用于9个各有不同Treg标有分解成的10个元簇的MST。每个端口都有一个坦克部队(100个坦克部队)，极其大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口两组四周上色。每个端口中会的饼左图声称单个标有的理解级别。(b)每个元聚类的热左图，以显示整体标有理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)分解成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster箱中会央线左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞会(l)。红色白点都有人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模标准型断定，TregHz的降低是成效缓迟的字样。PG暂时性(a - f)和大豆分析原理(g-k)比较SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的各有不同。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的纪念性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR理解展开裂解，模拟FlowSOM群体。(b) HD(网纹)和SP(斑点)两组以及NADPSP 606(红色)中会CD25+ cd127的Hz概要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性闭包的箱中会央线左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD描述符之间的各有不同。(j)箱中会央线左图显示了在SP(斑点)和HD(灰点)两组中会，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比丰度(比例)。(k)直方左图显示每个簇的表标准型(紫色)和Treg标有相比理解与文化背景理解(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。文化背景与所有其他簇中会标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身心健康献血者相比来说，成效缓迟者遗忘treg的GITR降低。每个遗忘CD4+T细胞会元簇(遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个理解标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的理解热左图(sp606不有数在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中会所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR理解串联，显示直方左图(c)和概要左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADP有数，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和冗余的HD不有数在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR理解，从PG暂时性，从所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串联，显示直方左图(e)和概要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自缓迟成效的CD4+ treg细胞会控制波动CD4+T细胞会的能力降低。SP两组用蓝色的中会央线和白点声称，HD两组用银色的中会央线和白点声称，红色的中会央线/白点声称NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，培养出来3天后展开流式细胞会奥义验证。(a-d)与CD4+此番者相比应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养出来。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE依赖性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百份。用于阳性对照(酪氨酸的作出反应细胞会不含treg)量化依赖性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析原理。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 波动CD4+T细胞会对缓迟成效的T细胞会再生的依赖性极其敏感。SP两组用蓝色的中会央线和白点声称，HD两组用银色的中会央线和白点声称，红色的中会央线/白点声称NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，培养出来3天后展开流式细胞会奥义(CD25反染)和细胞会因子分析原理。HD Treg与HD、SP或sp606此番者联合培养出来。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院出来中会的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析原理。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自缓迟成效子的再生遗忘CD4+Treg在GITR理解中会赢取了扩展和丰富，强调了进一步学奥义研究Treg在1标准型肝炎风险个体中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28